Fluconazole-resistant Candida parapsilosis: fast detection of the Y132F ERG11p substitution, and a proposed microsatellite genotyping scheme.
Autors de IIS La Fe
Autors aliens a IIS La Fe
- Guinea, Jesus
- Alcoceba, Eva
- Padilla, Eduardo
- Ramirez, Aida
- De Carolis, Elena
- Sanguinetti, Maurizio
- Munoz-Algarra, Maria
- Duran-Valle, Teresa
- Quiles-Melero, Inmaculada
- Merino, Paloma
- Gonzalez-Romo, Fernando
- Sanchez-Garcia, Aida
- Gomez-Garcia-de-la-Pedrosa, Elia
- Perez-Ayala, Ana
- Mantecon-Vallejo, Maria Angeles
- Cuetara, Maria Soledad
- Zurita, Nelly Daniela
- Garcia-Esteban, Coral
- Martinez-Jimenez, Maria Del Carmen
- Sanchez Castellano, Miguel Angel
- Reigadas, Elena
- Munoz, Patricia
- Escribano, Pilar
Grups d'Investigació
Abstract
OBJECTIVES: We propose fast and accurate molecular detection of the Y132F ERG11p substitution directly on pure-cultured Candida parapsilosis isolates. We also assessed a discriminative genotyping scheme to track circulating genotypes. METHODS: A total of 223 C. parapsilosis isolates (one patient each) from 20 hospitals, located in Spain and Italy were selected. Isolates were fluconazole-resistant (n = 94; harbouring the Y132F ERG11p substitution [n = 85], the G458S substitution [n = 6], the R398I substitution [n = 2], or the wild-type ERG11 gene sequence) or fluconazole-susceptible (n = 129). Two targeted-A395T-mutation PCR formats (conventional and real-time) were engineered and optimized on fluconazole-susceptible and fluconazole-resistant pure-cultured isolates, thus skipping DNA extraction. Two genotyping schemes were compared: Scheme 1 (CP1, CP4a, CP6, and B markers), and Scheme 2 (6A, 6B, 6C, CP1, CP4a, and CP6 markers). RESULTS: The screening performed using both PCR formats showed 100% specificity (fluconazole-susceptible isolates; n = 129/129) and sensitivity (Y132F isolates; n = 85/85) values; however, results were available in 3 and 1.5 hours with the conventional and real-time PCR formats, respectively. Overall, Scheme 1 showed higher genetic diversity than Scheme 2, as shown by the number of alleles detected (n = 98; mean 23, range 13-38), the significantly higher observed and expected heterozygosity, and the probability of identity index (2.5 × 10(-6)). Scheme 2 markers did not provide further genotypic discrimination of Y132F fluconazole-resistant genotypes. CONCLUSION: Both proposed PCR formats allow us to speed up the accurate detection of substitution Y132F ERG11p in C. parapsilosis isolates with 100% specificity and sensitivity. In addition, we recommend CP1, CP4a, CP6, and B microsatellite markers for genotyping fluconazole-resistant isolates.
Copyright © 2024 European Society of Clinical Microbiology and Infectious Diseases. Published by Elsevier Ltd. All rights reserved.
Dades de la publicació
- ISSN/ISSNe:
- 1198-743X, 1469-0691
- Tipus:
- Article
- Pàgines:
- 1447-1452
- PubMed:
- 39002661
- Factor d'Impacte:
- 3,111 SCImago ℠
- Quartil:
- Q1 SCImago ℠
CLINICAL MICROBIOLOGY AND INFECTION ELSEVIER SCI LTD
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- Candida parapsilosis; Fluconazole-resistant; Genotyping; Y132F
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